后疫情时代,应选择哪种新冠核酸检测试剂?

发表时间:2021-01-04来源:卓诚惠生,浏览次数:247 分享:


12月30号,国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组印发了《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行 第二版)》,该文件在业内引起巨大反响,主要原因是该文件首次明确了高灵敏度的试剂定义为检测限≤500拷贝/ml。我们就此文件来说一说,目前人群流行率极低(<0.1%)的情况下应该选择什么样的核酸检测试剂?

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高灵敏度

检测高灵敏度的核酸检测试剂能够有效的避免低浓度样本的漏检,在目前大规模人群筛查(特别是有混检)的情况下,核酸检测试剂的灵敏度非常重要。需要值得注意的是,“在用于临床标本检测前,实验室应对由提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性能验证,性能指标包括但不限于精密度(至少要有重复性)和最低检测限”,实际使用中,存在各种影响检测的因素,会出现试剂检测下限和说明书不符的情况,故推荐有DDPCR的实验室可对验证使用的样本进行绝对定量,无DDPCR的单位,可购买中国计量院的标准物质和第三方指控品作为验证样本使用


检测靶点

此前发布的多个技术规范和工作通知中均强调,检测靶点至少应该涵盖ORF1ab,N基因两个检测靶点。多靶点的检测,能够有效避免RNA病毒在复制过程当中发生突变而导致的漏检。

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数据来源:国家生物信息中心,新冠病毒信息库,2020-12-31


目前的基因系列分析,发现E基因相对稳定,突变很少,能够有效的避免基因突变导致的漏检。ORF1ab,N,E基因三个靶点的检测相对而言会比单靶点和双靶点的检测试剂更为灵敏


内标

在以往的多个技术规范中,推荐使用内源性内标的试剂作为首选。主要是为了解决采样过程中诸多采样不合格的问题,借用内源性内标对采样过程进行检测(但是事实上内源性内标和外源性内标均不能有效的监控是否采到病毒)。但是随着核酸检测的操作规范逐步推广,鼻咽拭子的采样已经成为各个医院,疾控系统必会的操作,采样的规范性大大提高。且随着入冬之后,国内北边地区出现了环境传人案例,对于环境样本的监测逐步成为各单位刚需,对于环境样本,内源性内标的试剂无法使用。推荐各单位至少储备一种外源性核酸检测试剂以应对接下来的环境监测需求


以下为内源性内标和外标的区别与比对:

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数据来源:枣阳市第一人民医院


B.1.1.7

B.1.1.7是一个有23个突变位点的毒株,其中17个为非同义突变,6个为同义突变。17个非同义突变中包括14个点突变和3个缺失突变,分别位于ORF1ab基因(4个),N基因(2个),ORF8基因(3个)和S(Spike)基因(8个)。其中,位于S基因上的突变提示该毒株在与宿主细胞的相互作用上可能存在变化。6个同义突变(其中5个位于ORF1ab上)提示该毒株存在适应性进化。该毒株有3个位于S基因上的关键突变,具有潜在的生物学功能,其中,最主要的突变为位于S基因上的N501Y突变(提高病毒与宿主蛋白AEC2受体的亲和力)。


英国的B.1.1.7突变是否会导致试剂漏检?


近日,卓诚惠生已经完成对现有新冠病毒荧光PCR检测试剂引物探针与国际上最新突变株(包含但不限于英国B 1.1.7突变株)的比对,突变位点不在检测范围内,不会导致突变病毒漏检。

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如何选择试剂?


1.灵敏度高(检测限≤500拷贝/ml,越低越好)

2.检测靶点较多(至少两个,三个最好)

3.可用于环境检测的(至少储备一种外源性内标核酸检测试剂)

4.避开英国B1.1.7突变病毒株突变位点的核酸检测试剂。

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